「助研大禮包」CCK8試劑盒免費領(lǐng)啦！

發(fā)布時間：2025/3/12 9:44:49 閱讀次數(shù)：11

睿信生物精心打造的ELISA檢測試劑盒系列

以卓越的特異性高樣本回收率及超高檢測靈敏度
在科研領(lǐng)域獲得廣泛認可與用戶口碑
今日重磅推出助研大禮包

CCK8 試劑盒
現(xiàn)正式開放免費試用申請通道！
真正實現(xiàn)"一盒在手,實驗無憂"的科研體驗
助力科研人員精準高效完成檢測任務(wù)

一 實驗原理

CCK-8(Cell Counting Kit-8)是一種基于水溶性四唑鹽(WST-8)的高靈敏度細胞活性檢測方法.其核心原理是：活細胞線粒體內(nèi)的脫氫酶可將WST-8還原為橙黃色甲臜(Formazan),生成的甲臜量與活細胞數(shù)量成正比.通過檢測450nm波長下的吸光度(OD值),可間接反映細胞增殖或毒性狀態(tài).相較于傳統(tǒng)MTT法,CCK-8無需溶解步驟毒性低且靈敏度更高(可檢測低至1000個細胞).

二實驗步驟詳解

在CCK-8增殖實驗中,精確的實驗步驟是獲取可靠結(jié)果的關(guān)鍵.下面我們詳細討論實驗的核心步驟：

細胞種植處理細胞并確定合適的種植密度.通常,細胞需要在無菌條件下傳代,使用含有適當抗生素的培養(yǎng)基以防污染.

種植密度應(yīng)根據(jù)細胞類型和實驗設(shè)計調(diào)整,確保細胞在實驗過程中能達到適宜的生長狀態(tài).一般推薦在每個孔中種植數(shù)千至數(shù)萬細胞,具體數(shù)字根據(jù)細胞的生長速率和實驗的持續(xù)時間而定.

添加CCK-8試劑實驗的下一步是添加CCK-8試劑.

在添加前,先按照說明書推薦的比例對試劑進行稀釋.

添加量通常是根據(jù)培養(yǎng)板孔的體積而定,例如,每個96孔板的孔中添加10微升試劑.添加試劑后,將培養(yǎng)板輕輕晃動幾次,以確保試劑與培養(yǎng)基充分混合.

然后將培養(yǎng)板放回細胞培養(yǎng)箱中,根據(jù)細胞類型,孵育時間通常在1到4小時之間.

觀察與記錄

在孵育期間,重要的是保持培養(yǎng)箱的條件穩(wěn)定,并避免頻繁打開以減少溫度和濕度的波動.數(shù)據(jù)記錄是實驗中至關(guān)重要的一步.

從培養(yǎng)板中取出后,應(yīng)立即使用酶標儀測量吸光度.記錄每個孔的讀數(shù),注意任何異常值或可能的污染跡象.

三 數(shù)據(jù)處理與分析

在CCK-8實驗中,數(shù)據(jù)處理與分析是揭示實驗結(jié)果的關(guān)鍵步驟.以下是詳細的分析流程：

數(shù)據(jù)的讀取完成孵育后,使用酶標儀讀取吸光度是第一步.確保酶標儀校準正確,設(shè)置適當?shù)牟ㄩL（通常為450 nm）.將培養(yǎng)板放置在儀器中,儀器將自動測量每個孔中的吸光度值.這些值反映了培養(yǎng)孔中細胞的活性,從而可以評估細胞的增殖情況.

數(shù)據(jù)分析獲取吸光度數(shù)據(jù)后,下一步是計算細胞存活率.將實驗組和對照組的平均吸光度值進行比較.細胞存活率可以通過以下公式計算：

（實驗組吸光度 - 空白組吸光度）/（對照組吸光度 - 空白組吸光度）× 100%

使用圖表軟件如Excel或?qū)I(yè)統(tǒng)計軟件如GraphPad Prism,可以繪制出生長曲線,直觀展示細胞增殖趨勢.

結(jié)果解釋分析數(shù)據(jù)時,重要的是評估實驗結(jié)果的可靠性.檢查數(shù)據(jù)是否有異常值,比如意外的吸光度高值或低值,這可能表明操作錯誤或污染.同時,確保重復(fù)實驗的結(jié)果一致性.數(shù)據(jù)一致性高通常表示實驗操作穩(wěn)定,結(jié)果可靠.

另外,結(jié)果的生物學意義也需考慮,比如細胞反應(yīng)是否符合預(yù)期的生物學行為.通過這些步驟,不僅可以保證數(shù)據(jù)處理的精確性,還能深入理解實驗結(jié)果背后的生物學意義,為進一步的研究提供堅實的數(shù)據(jù)支持.

四 注意事項與常見問題

常見問題及解決方案

試劑穩(wěn)定性：確保CCK-8試劑儲存于推薦的條件下,通常是避光冷藏.使用前務(wù)必檢查試劑是否有變色或沉淀現(xiàn)象,這可能影響實驗結(jié)果的準確性.

細胞污染：操作中應(yīng)始終保持無菌環(huán)境.使用無菌操作臺和經(jīng)過嚴格消毒的工具.如果發(fā)現(xiàn)細胞污染,應(yīng)立即丟棄受污染的細胞,并徹底清潔所有設(shè)備和工作區(qū)域.

實驗技巧分享

均勻添加試劑：添加CCK-8試劑時,使用多通道移液槍以保證每個孔中試劑量的一致性.輕輕晃動培養(yǎng)板,使試劑與培養(yǎng)基充分混合,避免產(chǎn)生氣泡.

準確計時：設(shè)置明確的計時提醒,以確保所有孔的孵育時間一致,防止由于時間差異導(dǎo)致的數(shù)據(jù)偏差.

睿信生物國內(nèi)優(yōu)質(zhì) ELISA 試劑盒供應(yīng)商泉州市睿信生物科技有限公司(Quanzhou Ruixin Biotechnology Co.,Ltd)是一家專業(yè)從事免疫學相關(guān)的檢測試劑研發(fā) 生產(chǎn) 銷售技術(shù)服務(wù)四位一體的技術(shù)型企業(yè),擁有分子生物學平臺細胞生物學平臺蛋白表達純化平臺優(yōu)質(zhì)抗體制備平臺以及免疫學研發(fā)平臺.主要產(chǎn)品為ELISA試劑盒生化試劑盒抗體抗原耗材及免疫檢測相關(guān)試劑和免疫檢測服務(wù)!

「科研助力計劃啟動」

睿信生物CCK8 試劑盒 試用裝

免費申請進行中

掃描下方二維碼即可申請